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产品名称: iElisa 赭曲霉毒素 A 检测试剂盒
产品时间: 2019-10-23
产品型号: (C/N: CE204)
产品特点: iElisa 赭曲霉毒素 A 检测试剂盒
iElisa 赭曲霉毒素 A 检测试剂盒
iElisa 赭曲霉毒素 A 检测试剂盒

iElisa 赭曲霉毒素 A 检测试剂盒 的详细介绍

iElisa 赭曲霉毒素 A 检测试剂盒 

iElisa 赭曲霉毒素 A 检测试剂盒 

1. 概要 赭曲霉毒素A由 Aspergillus 和 Penicillium 两类霉菌产生,除明显的肾毒性外,赭曲霉毒素 A 还表现出肝毒性、致畸性、致癌性和免疫抑制性等 特性。对人体健康而言,危害不仅来源于污染的植 物性食品,也通过动物性食品的摄入。我国规定谷 物、豆类及其制品中赭曲霉毒素A不得超过5μg/kg, 欧盟规定谷物、豆类及其制品中赭曲霉毒素 A 不得 超过 3μg/kg。 2. 原理 测定的基础是抗原-抗体反应。微孔板上包被有 抗抗体。加入赭曲霉毒素 A(OTA)标准品或样品、 酶标抗原和抗体后,游离的赭曲霉毒素 A 与酶标抗 原竞争结合抗体,抗体或抗体结合物与固定在微孔 板上的抗抗体再结合,没有结合的标准品、酶标抗 原及抗体被洗去,加入 TMB 底物显蓝色,加入终 止液后颜色由蓝变黄,用酶标仪在 450nm 处检测, 吸光值与样品中赭曲霉毒素 A 含量成负相关,与标 准曲线比较即可得出赭曲霉毒素 A 的含量。 3. 试剂盒组成 1) 包被有抗抗体的96微孔板:1块(96孔,12条×8 孔) 2) 赭曲霉标准品:0 ppb、0.2 ppb、0.5 ppb、 1.0 ppb、 2.0 ppb、5.0 ppb 1 瓶 × 1.0ml 3) OTA抗体: 1 瓶 × 10ml 4) OTA酶标抗原: 1 瓶 × 10ml 5) 10× 浓缩洗涤液: 1 瓶 × 50ml 6) OTA稀释缓冲液: 1 瓶 ×50ml 7) 显色底物液: 1 瓶 ×17ml 8) 反应终止液: 1 瓶 × 7ml 9) 试剂盒说明书 10) 质检报告 4. 需要的仪器、试剂 1)仪器 —酶标仪 450nm(iElisa 全自动酶标仪或相当者) —微量移液器:20μl-200μl 单道,100μl-1000μl 单道, 50μl-300μl 八道 —多功能旋转混合器(或者摇床、高速均质器) —酶标板振荡器 —涡旋混合器 —50ml 离心管 —1.5ml 离心管 —定性滤纸 —过滤漏斗 —天平:感量 0.01g 2)试剂 —样品提取液 70%甲醇:取 700ml 甲醇,加 300ml 纯水,混匀。 —纯水(蒸馏水、去离子水) 5. 样品处理 5.1 谷物(玉米、小麦、大麦、大米、大豆): 1) 称取 5.0g 粉碎样品于 50ml 离心管中,加入 25.0ml 样品提取液 70%甲醇,置于多功能旋转 混合器上振荡 10 分钟(或使用高速均质器均质 3 分钟,或摇床上振荡 40 分钟)。 2) 将提取液用普通滤纸过滤,吸取 200μl 滤液置 于 1.5ml 离心管中,加入 200μl OTA 稀释缓冲 液,用涡旋混合器混匀。 稀释倍数:10 5.2 饲料: 1) 称取 5.0g 粉碎样品于 50ml 离心管中,加入 25.0ml 样品提取液 70%甲醇,置于多功能旋转 混合器上振荡 10 分钟(或使用高速均质器均 质 3 分钟,或摇床上振荡 40 分钟)。 2) 将提取液用普通滤纸过滤,吸取 100μl 滤液置 于 1.5ml 离心管中,加入 400μl OTA 稀释缓冲 液,用涡旋混合器混匀。 稀释倍数:25 5.3 尿液样品: 1) 取 5ml 待检样品于 15ml 离心管中,3000r/min, 离心 10 分钟2) 吸取 100μl 离心后澄清样品置于 1.5ml 离心管 中 3) 加入 400μl OTA 稀释缓冲液,用涡旋混合器混 匀。 稀释倍数:5 6.酶联免疫分析程序 6.1 测定之前注意事项 1) 使用前将所有试剂平衡至室温(20-25℃)。 2) 使用后迅速将试剂放入 2-8℃冷藏。 3) 在 ELISA 分析中的再现性,很大程度上取决于 洗板的*性,正确的洗板操作是 ELISA 测定 程序中的要点。 4) 所有孵育过程应避免阳光直射,并按要求用盖 板覆盖住酶标板。 6.2 溶液的配制 1) 提取液的配制: 根据实验所需的量配制 70%的 甲醇水溶液(水要用纯水、或蒸馏水、去离子 水) 2) 洗涤液的配制:将浓缩洗涤液用去离子水稀释 10 倍后使用(1 份浓缩洗涤液加 9 份蒸馏水)。 6.3 测定程序 1) 将足够标准品和样品所用数量的孔条插入酶 标板架,标准品和样品做两个平行实验,记录 下标准和样品的位置。未使用的酶标板用铝箔 袋封好置 2-8℃冷藏保存。 2) 分别吸取 50μl 标准品和样品加至相应的微孔 (双孔)中,然后各加入 50μl 酶标抗原,再 加入 50μl 抗体,加盖,在室温反应 40min(每 个标准和样品必须使用新的吸头)。 3) 倒出孔中的液体,将微孔架倒置在吸水纸上拍 打以保证完全除去孔中的液体,然后每孔加入 250μl 稀释好的洗涤液洗涤,振荡后倒出孔中 的液体,拍干;重复操作四次,洗板时每次间 隔20s,洗完后用力在吸水纸上排干。 4) 每孔加入150μl底物, 室温避光温育15min。 5) 每孔加入50μl 反应终止液,混匀。 6) 置于酶标仪中,振荡混匀,在450nm处测定吸 光度值(OD值),参比波长630nm。(iElisa全 自动酶标仪可以直接读出、打印浓度值)。 7. 结果判定 1) 所获得的每个浓度标准溶液和样本吸光度值 的平均值(B)除以*个标准(0 标准)的吸 光度值(B0)再乘以 100%,即百分吸光度值。 百分吸光度值(%)= B ×100% B0 以赭曲霉毒素 A 标准品浓度值(ppb)为 X 轴, 百分吸光度值为 Y 轴,绘制标准曲线图。相对应每 一个样品的浓度可以从标准曲线上读出。也可以用 回归方程法,计算出样本溶液浓度。利用计算机专 业软件,更便于大量样品的快速分析。 2) 样品的实际浓度为读数结果乘以相应的稀释倍 数。 3) 如果测定值超出检测范围,样品提取溶液按一 定的比例用 70%甲醇进行稀释。 8. 注意事项 1) 室温低于20℃或试剂及标本未回到室温(20- 25℃)会导致数值偏低。 2) 在洗板过程中如果出现板孔干燥过久的情况, 则会出现标准曲线不成线性,重复性不好的现 象。所以洗板排干后应立即进行下一步操作。 3) 标准物质和显色液对光敏感,避免直接暴露在 光线下。 4) 混合要均匀,洗板要彻底(包括加样品和标准 液的时候都必需充分混合均匀)。 5) 反应停止液为强酸性物质,避免接触皮肤。 6) 不要使用过了有效期的试剂盒,也不要稀释或 搀杂使用不同生产厂家的试剂盒这样会引起 灵敏度降低。 7) 试剂盒的储存条件是2-8℃,切勿冷冻。 9. 检测方法灵敏度、准确度、精密度 1) 检测限 LOD: 谷物 1ppb(μg /kg),饲料 2.5ppb 尿液 1.0。(LOD:空白样品测定值+2 倍标准偏 差 SD) 2) 定量限 LOQ: 谷物 2ppb,饲料 5ppb,尿液 1.5ppb。 3) 定量检测范围:谷物 2-50ppb,饲料 5-125ppb, 饲料 1.5-25ppb。

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