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产品名称: iElisa 呕吐毒素检测试剂盒
产品时间: 2019-10-23
产品型号: (C/N: CE 206)
产品特点: iElisa 呕吐毒素检测试剂盒

iElisa 呕吐毒素检测试剂盒

iElisa 呕吐毒素检测试剂盒

iElisa 呕吐毒素检测试剂盒 的详细介绍

iElisa 呕吐毒素检测试剂盒

iElisa 呕吐毒素检测试剂盒

1. 概要 呕吐毒素也称为脱氧雪腐镰刀菌烯醇(DON), 是由串珠镰刀菌、轮状镰刀菌以及多育镰刀菌等产 生的真菌毒素,大多存在于粮谷、饲料及其制品中。 中毒后影响消化系统和神经系统,主要表现为恶 心、呕吐、头痛、头晕、腹痛、腹泻等症状。我国 标准规定:玉米、大麦、小麦及其制品中呕吐毒素 不得超过 1mg/kg,猪、犊牛、泌乳期动物配合饲料 中呕吐毒素不得超过 1mg/kg,牛、家禽配合饲料中 呕吐毒素不得超过 5mg/kg。 2. 原理 测定的基础是抗原-抗体反应。微孔板上包被有 抗抗体。加入呕吐毒素(DON)标准品或样品、酶 标抗原和抗体后,游离的呕吐毒素与酶标抗原竞争 结合抗体,抗体或抗体结合物与固定在微孔板上的 抗抗体再结合,没有结合的标准品、酶标抗原及抗 体被洗去,加入 TMB 底物显蓝色,加入终止液后 颜色由蓝变黄,用酶标仪在 450nm 处检测,吸光值 与样品中呕吐毒素含量成负相关,与标准曲线比较 即可得出呕吐毒素的含量。 3. 试剂盒的组成 1) 包被有抗抗体的96微孔板:1块(96 孔,12 条 ×8 孔) 1) 呕吐毒素标准品:0 ng/ml 、10ng/ml、 20ng/ml、50ng/ml、200ng/ml 1 瓶 × 1.0ml 2) DON抗体: 1 瓶 × 10ml 3) DON酶标抗原: 1 瓶 × 10ml 4) 10× 浓缩洗涤液: 1 瓶 × 50ml 5) DON稀释缓冲液A: 1 瓶 ×50ml 6) DON稀释缓冲液B: 1 瓶 ×50ml 7) 显色底物TMB: 1 瓶 ×17ml 8) 终止液: 1 瓶 × 7ml 9) 试剂盒说明书: 1 份 10) 质检报告: 1 份 4. 需要的仪器、试剂 1) 仪器 —酶标仪 450nm(iElisa 全自动酶标仪或相当者) —微量移液器:20μl-200μl 单道,100μl-1000μl 单道, 50μl-300μl 八道 —多功能旋转混合器(或者摇床、高速均质器) —酶标板振荡器 —涡旋混合器 —离心机 —50ml 离心管 —1.5ml 离心管 —定性滤纸 —过滤漏斗 —天平:感量 0.01g 2) 试剂 —纯水(蒸馏水、去离子水) 5. 样品处理 5.1 谷物(玉米、小麦、大麦、大米、大豆): 1) 称取 5.0g 粉碎样品于 50ml 离心管中,加入 25.0ml 样品提取液纯水,置于多功能旋转混合 器上振荡 10 分钟(或使用高速均质器均质 3 分钟,或摇床上振荡 40 分钟),3000 转/分离 心 5min。 2) 将上层提取液用普通滤纸过滤,吸取 100μl 滤 液置于 1.5ml 离心管中,加入 400μl DON 稀释 缓冲液 A,用涡旋混合器混匀。 稀释倍数:25 5.2 饲料: 1) 称取 5.0g 粉碎样品于 50ml 离心管中,加入 25.0ml 样品提取液纯水,置于多功能旋转混合 器上振荡 10 分钟(或使用高速均质器均质 3 分钟,或摇床上振荡 40 分钟),3000 转/分离 心 5min。 2) 将上层提取液用普通滤纸过滤,测 pH 值,如 果不在 pH6-8 范围内,请用酸或碱进行调整。 3) 吸取 50μl 滤液置于 1.5ml 离心管中,加入 450ul DON 稀释缓冲液 B,用涡旋混合器混匀。 稀释倍数:50 5.3 发酵液: 吸取 40μl 液体样品置于 1.5ml 离心管中,加入 960μl DON 稀释缓冲液 B,用涡旋混合器混匀。 稀释倍数:255.4 尿液样品: 1) 取 5ml 待检样品于 15ml 离心管中,3000r/min, 离心 10 分钟 2) 吸取 100μl 离心后澄清样品置于 1.5ml 离心管 中 3) 加入 400μl DON 稀释缓冲液 A,用涡旋混合器 混匀。 稀释倍数:5 6. 酶联免疫分析程序 6.1 测定之前注意事项 1) 使用前将所有试剂平衡至室温(20-25℃)。 2) 使用后迅速将试剂放入 2-8℃冷藏。 3) 在 ELISA 分析中的再现性,很大程度上取决于 洗板的*性,正确的洗板操作是 ELISA 测定 程序中的要点。 4) 所有温育过程应避免阳光直射,并按要求用盖 板覆盖住酶标板。 6.2 溶液的配制 1) 提取液的配制:纯水(或蒸馏水、去离子水)。 2) 洗涤液的配制:将浓缩洗涤液用纯水稀释 10 倍后使用。(例如:取 10 ml 浓缩液+90 ml 纯 水, 可以用于 32 孔的检测)。 6.3 测定程序 1) 将足够标准品和样品所用数量的孔条插入酶 标板架,标准品和样品做两个平行实验,记录 下标准和样品的位置。未使用的酶标板用铝箔 袋封好置 2-8℃冷藏保存。 2) 吸取 50μl 标准品或样品分别加至相应的微孔 (双孔)中,然后各加入 50μl 的 DON 酶标抗 原、50μl 的 DON 抗体,加盖,在 37℃温育 30 分钟(每个标准品和样品必须使用新的吸头)。 3) 倒出孔中的液体,每孔加入 250μl 稀释好的洗 涤液,置于酶标板振荡器上振荡 30 秒钟(或 者手工振荡),重复操作四次。洗完后用力在 吸水纸上拍干。 4) 每孔加入150μl底物,37℃避光温育10分钟。 5) 每孔加入50μl 终止液。 6) 置于酶标仪中,振荡混匀,在450nm处测定吸 光度值(OD值),参比波长630nm。(iElisa全 自动酶标仪可以直接读出、打印浓度值)。 7. 结果判定 1) 所获得的每个浓度标准溶液和样本吸光度值 的平均值(B)除以*个标准(0 标准)的吸 光度值(B0)再乘以 100%,即百分吸光度值。 百分吸光度值(%)= B ×100% B0 以呕吐毒素标准品浓度值(ppb)为 X 轴,百 分吸光度值为 Y 轴,绘制标准曲线图。相对应每一 个样品的浓度可以从标准曲线上读出。也可以用回 归方程法,计算出样本溶液浓度。利用计算机专业 软件,更便于大量样品的快速分析。 2) 样品的实际浓度为读数结果乘以相应的稀释倍 数。 3) 如果测定值超出检测范围,样品提取溶液按一 定的比例用纯水进行稀释。 8. 注意事项 1) 室温低于20℃或试剂及样品未回到室温(20- 25℃)会导致数值偏低。 2) 在洗板过程中如果出现板孔干燥过久的情况, 则会出现标准曲线不成线性,重复性不好的现 象。所以洗板排干后应立即进行下一步操作。 3) 标准物质和显色液对光敏感,避免直接暴露在 光线下。 4) 混合要均匀,洗板要彻底(包括加样品和标准 液的时候都必需充分混合均匀)。 5) 终止液为强酸性物质,避免接触皮肤。 6) 不要使用过了有效期的试剂盒,也不要混合使 用不同批次的试剂盒,这样会引起测定结果不 准确。 7) 试剂盒的储存条件是2-8℃,切勿冷冻。 9. 试剂盒的性能指标 1) 检测限 LOD: 谷物 0.15ppm(mg/kg),饲料 0.25ppm(mg/kg),发酵液 0.15ppm(mg/kg), 尿液 0.05ppm(mg/kg)。(LOD:空白样品测定 值+2 倍标准偏差 SD) 2) 定量限 LOQ: 谷物 0.25ppm(mg/kg),饲料 0.5ppm(mg/kg),发酵液 0.25ppm(mg/kg), 尿液 0.1ppm(mg/kg)。 3) 定 量 检 测 范 围 : 谷 物 0.25-5.0ppm ,饲料 0.5-10.0ppm , 发 酵 液 0.25-5.0ppm, 尿 液 0.1-1.0ppm。

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