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产品名称: iElisa 恩诺沙星检测试剂盒
产品时间: 2019-10-23
产品型号: (C/N: CE103)
产品特点: iElisa 恩诺沙星检测试剂盒

iElisa 恩诺沙星检测试剂盒

iElisa 恩诺沙星检测试剂盒

iElisa 恩诺沙星检测试剂盒 的详细介绍

iElisa 恩诺沙星检测试剂盒

iElisa 恩诺沙星检测试剂盒

1. 概要 本试剂盒是应用 ELISA 技术研发的药物残留检 测产品,与仪器分析技术比较,能经济、快速地检测 出蜂蜜、鸡肉、鱼虾、肝脏等中的恩诺沙星。 2、原理 本试剂盒是利用竞争 ELISA 方法,在酶标板微 孔上预包被抗 恩诺沙星抗原。检测时,加入标准 品或样品溶液,恩诺沙星抗体及酶标记物,包被抗 原和加入样本中的恩诺沙星竞争性地与恩诺沙星 抗体结合后,再与酶标记物形成抗原抗体复合物, 用 TMB 底物显色;加入反应终止液,在 450nm 波 长酶标仪下进行检测,样品中的恩诺沙星浓度与吸 收光强度成反比。 与类似物的交叉反应率: 恩诺沙星……………………………100% 环丙沙星……………………………3.4% 诺氟沙星……………………………6.3% 沙拉沙星……………………………2.5% 其它沙星类药物交叉反应率均小于 0.1% 2. 试剂盒组成 酶标板 1 块,96 孔/板 标准液 6 瓶(1ml/瓶): 0 ppb 、0.5ppb、1.5ppb、4.5ppb、13.5ppb、40.5ppb 抗体工作液 ………………………7ml 酶标记物 …………………………7ml 底物液 A …………………………7ml 底物液 B …………………………7ml 终止液 …………………………7ml 20X 浓缩洗涤液 ………………40 ml 2X 浓缩复溶液 ………………50 ml 说明书 ……………………………1 份 4. 需要的仪器、试剂 (1)设备 ……微孔板酶标仪(450nm) ……振荡器、离心机 ……微量移液器:20μl~200μl,100μl~1000μl ……容量瓶:100ml,500ml,1000ml (2)试剂 ……二氯甲烷、乙腈、NaOH、Na2HPO4.12H2O、 NaH2PO4.2H2O、正己烷 样本前处理需配制: 配液 1:pH7.2 0.05M PB 缓冲液 称取 12.9gNa2HPO4•12H2O,2.175gNaH2PO4• 2H2O 去离子水 1L 溶解。 配液 2:乙腈-0.1M HCL 溶液 V 乙腈:VHCL= 84:16 配液 3:正己烷-二氯甲烷混合溶液 V 正己烷:V 二氯甲烷 =2:8 配液 4:复溶工作液 2X 浓缩复溶液在使用前请按 1:1 稀释 (1 份浓缩复溶液+1 份去离子水) 配液 5:洗涤液 将 40ml 浓缩洗涤液(20 倍浓缩)用去离子水稀释 20×浓缩洗涤液在使用前请按 1:19 稀释(1 份浓 缩洗涤液+19 份去离子水)(可按需配置) 5. 样品处理 样本处理前须知 处理任何样本时,都须注意: (1)实验中必须使用一次性吸头,在吸取不同的 试剂时要更换吸头。 (2)实验之前须检查各种实验器具是否干净,必 须使用洁净实验器具,以避免污染干扰实验结果。 样本处理步骤: (A)鱼、虾和鸡肉(样本稀释倍数 2) (1)称 2.0±0.05g 均质过的组织样本于 50ml 离心 管中; (2)加入乙腈-0.1M HCL 溶液 4ml,充分振荡 5 分 钟,再加入正己烷-二氯甲烷混合溶液 4ml,振荡 5 分钟,室温 4000 转/分,离心 10 分钟; (3)取 2ml 清澈上层有机相至干净玻璃试管中, 56℃水浴氮气/空气吹干; (4)加 1ml 正已烷振荡 30 秒,再加入 1ml 复溶工 作液充分振荡混合 30 秒;室温 4000 转/分,离心 5 分钟; (5)去除上层有机相,取下层 50µl 液体用于分析(B)蜂蜜(样本稀释倍数 2) (1)称取 1±0.05g 蜂蜜于 50ml 离心管中,加 6ml 乙腈-0.1M HCL 溶液振荡至蜂蜜全部溶解; (2)加入 3ml 0.05M PB 缓冲液,再加入 11ml 二 氯甲烷,振荡 5 分钟,室温 4000 转/分,离心 5 分 钟; (3)去除上层水相,取下层有机相 8ml 至干净玻 璃试管中,56℃水浴氮气/空气吹干; (4)加 1ml 正已烷振荡 30 秒,再加入 1ml 复溶工 作液充分振荡混合 30 秒;室温 4000 转/分,离心 5 分钟; (5)去除上层有机相,取下层 50µl 液体用于分析。 6. 酶联免疫分析程序 测定前须知: 1、使用之前将所有试剂和需用微孔板回升至室温。 2、使用之后立即将所有试剂放回 2-8℃。 3、在使用中不要让微孔干燥。 4、在 ELISA 分析中的重复性,很大程度上取决于 洗板的*性,正确的洗板操作是 ELISA 测定程序 中的要点。 5、在所有恒温孵育过程中,避免光线照射,用该 板膜盖住微孔板。 测定步骤: 1、将所需试剂从冷藏环境中取出,在室温下平衡 30 分钟,每种液体使用前均须摇匀。注意标准液均 需做 2 个平行试验。 2、加标准品/样本 50µl /孔,然后加酶标记物 40μl/ 孔,再加入抗体工作液 40µl/孔。轻轻振荡混匀,用 盖板膜盖板,25℃下避光反应 1 小时。 3、洗板:小心揭开盖板膜,将孔内液体甩干,加 洗涤液 250ml/孔,每次浸泡 15~30 秒,充分洗涤 4 -5 次,用吸水纸拍干。 4、显色:每孔先各加入底物液 A 50μl,再各加入 底物液 B 50μl,轻轻晃荡混匀,并在 25℃下避光反 应 15 分钟。 5、读数:每孔各加 50μl 终止液,在酶标仪于 450nm 处测定 OD 值(建议用 450/630nm 双波长检测,在 5 分钟内读完数据)。 7. 结果判定 1) 所获得的每个浓度标准溶液和样本吸光度值 的平均值(B)除以*个标准(0 标准)的吸 光度值(B0)再乘以 100%,即百分吸光度值。 百分吸光度值(%)= B ×100% B0 以恩诺沙星准品浓度值(ppb)为 X 轴,百分 吸光度值为 Y 轴,绘制标准曲线图。相对应每一个 样品的浓度可以从标准曲线上读出。也可以用回归 方程法,计算出样本溶液浓度。利用计算机专业软 件,更便于大量样品的快速分析。 2) 样品的实际浓度为读数结果乘以相应稀释倍 数。 8. 注意事项 1) 室温低于20℃或试剂及标本未回到室温(20- 25℃)会导致数值偏低。 2) 在洗板过程中如果出现板孔干燥过久的情况, 则会出现标准曲线不成线性,重复性不好的现 象。所以洗板排干后应立即进行下一步操作。 3) 标准物质和显色液对光敏感,避免直接暴露在 光线下。 4) 混合要均匀,洗板要彻底(包括加样品和标准 液的时候都必需充分混合均匀)。 5) 反应停止液为强酸性物质,避免接触皮肤。 6) 不要使用过了有效期的试剂盒,也不要稀释或 搀杂使用不同生产厂家的试剂盒这样会引起 灵敏度降低。 7) 试剂盒的储存条件是2-8℃,切勿冷冻。 9. 检测方法灵敏度、准确度、精密度 试剂盒灵敏度:0.5ppb 样本低检测限: 组织样本…………………… 1ppb 蜂蜜样本……………………1ppb 回收率: 组织样本………………………………85±10% 蜂蜜样本 …………………………… 85±10% 精密度: 试剂盒的变异系数均小于 10%

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