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产品名称: iElisa 玉米赤霉醇检测试剂盒
产品时间: 2019-10-23
产品型号: (C/N: CE 116)
产品特点: iElisa 玉米赤霉醇检测试剂盒

iElisa 玉米赤霉醇检测试剂盒

iElisa 玉米赤霉醇检测试剂盒

iElisa 玉米赤霉醇检测试剂盒 的详细介绍

iElisa 玉米赤霉醇检测试剂盒 

iElisa 玉米赤霉醇检测试剂盒 

2. 概要 玉米赤霉醇(zeranol,ZER),属于雷索酸内酯 类非甾体同化激素。ZER 作为牛羊促生长剂,以耳 根埋植的形式应用,促进蛋白质的合成,能提高胴 体瘦肉率及饲料转化率。但是,玉米赤霉醇具有弱 雌激素作用,在动物尿液中的残留会引起人体性机 能紊乱及影响第二性征的正常发育,在外部条件诱 导下,还可能致癌。ZER 排出动物体外后,还可经 饮水和食物造成二次污染及环境污染。1998 年欧盟 禁止将玉米赤霉醇等激素类药物应用于畜禽养殖, 我国农业部第 235 号公告明确规定玉米赤霉醇禁用 于所有食品动物,所有可食动物尿液不得检出。 3. 原理 测定的基础是抗原-抗体反应。微孔板上包被有 抗抗体。加入玉米赤霉醇(ZER)标准品或样品、 酶标抗原和抗体后,游离的玉米赤霉醇与酶标抗原 竞争结合抗体,抗体或抗体结合物与固定在微孔板 上的抗抗体再结合,没有结合的标准品、酶标抗原 及抗体被洗去,加入 TMB 底物显蓝色,加入终止 液后颜色由蓝变黄,用酶标仪在 450nm 处检测,吸 光值与样品中玉米赤霉醇含量成负相关,与标准曲 线比较即可得出玉米赤霉醇的含量。 4. 试剂盒的组成 1) 包被有抗抗体的96微孔板:1块(96 孔,12 条 ×8 孔) 2) 玉米赤霉醇标准品:0 ng/ml 、0.5ng/ml、 2.0ng/ml、5.0ng/ml、15.0ng/ml、50.0ng/ml; 1 瓶 × 1.0ml 3) ZER酶标抗原: 1 瓶 ×10ml 4) ZER抗体: 1 瓶 × 10ml 5) 10× 浓缩洗涤液: 1 瓶 × 50ml 6) 复溶液 1 瓶 × 30ml 7) 稀释缓冲液A: 1 瓶 ×50ml 8) 稀释缓冲液B: 1 瓶 ×50ml 9) 稀释缓冲液C: 1 瓶 ×50ml 10) 显色底物TMB: 1 瓶 ×17ml 11) 终止液: 1 瓶 × 7ml 12) 试剂盒说明书: 1 份 13) 质检报告: 1 份 4. 需要的仪器、试剂 1)仪器 —酶标仪 450nm(iElisa 全自动酶标仪或相当者) —微量移液器:20μl-200μl 单道,100μl-1000μl 单道, 50μl-300μl 八道 —多功能旋转混合器(或者摇床、高速均质器) —酶标板振荡器 —涡旋混合器 —50ml 离心管 —1.5ml 离心管 —定性滤纸 —过滤漏斗 —天平:感量 0.01g —吹干器 —匀质器 2) 试剂 —样品提取液 70%甲醇:取 700ml 甲醇,加 300ml 纯水,混匀。 —纯水(蒸馏水、去离子水) —吹干器 —匀质器 5. 样品处理 5.1 牛肉样品: 1) 称取1.0g匀质肉样,加入2ml去离子水,加入8μl 葡萄糖醛酸酶/芳基硫酸酯酶,水浴 37℃ 2h。 2) 取出后,加入 8ml 乙腈,振荡 20min。离心 3000r/min 10min。 3) 取 5ml 上清液于另一干净离心管中,加入 2ml 三氯甲烷和 6ml 正己烷,涡旋 30s,振荡 20min。 3000r/min 离心 10min。 4) 去除上层正己烷,完全去除中间层与另一试管 中,吹干后,用 1ml 复溶液复容。 5) 用稀释缓冲液 A 按 1:4(5 倍稀释)的比例稀 释(吸取 100μl 复溶液,加入 400μl 稀释液缓 冲液 A)。 稀释倍数:105.2 牛奶样品 14) 取 1.0ml 新鲜牛奶,加入 8μl 葡萄糖醛酸酶/芳 基硫酸酯酶,水浴 37℃ 2h。 15) 用稀释缓冲液 B 按 1:9(10 倍稀释)的比例 稀释(吸取 50μl 样品,加入 450μl 稀释液缓冲 液 B)。 稀释倍数:10 5.3 尿液样品 1) 取 2.0ml 尿液于离心管中,室温 3000r/min, 10min,离心,取 1ml 澄清尿液于另一离心管 中,加入 10μl 葡萄糖醛酸酶/芳基硫酸酯酶, 水浴 37℃ 3h。 2) 取出后加入 5ml 三氯甲烷,振荡 20min,室温 3000r/min,10min,离心。 3) 取 2.5ml 下层溶液液于一干净试管中吹干,用 1.0ml 复溶液复容。 4) 用稀释缓冲液 B 按 1:4(5 倍稀释)的比例稀 释(吸取 100μl 复溶液,加入 400μl 稀释液缓 冲液 B)。 稀释倍数:10 5.4 饲料样品 1) 称取 2.0g 粉碎样品,加入 10ml 乙腈-0.1mol/L NaOH,振荡 20min,室温离心 3000g,10min。 取 1ml 上清液,50℃,氮气吹干。 2) 用 0.5ml 三氯甲烷溶解,加入 2ml 1mol/L NaOH,振荡 10min,室温离心 3000r/min, 10min。取 1ml 上清液,加入 100μl 6M H3PO4 再加入 5ml 三氯甲烷,振荡 10min,室温离心 3000r/min,10min。取 2.5ml 下层底液,50℃ 吹干。再用 1ml 复溶液复容。 3) 用稀释缓冲液 C 按 1:9(10 倍稀释)的比例 稀释(吸取 100μl 复溶液,加入 900μl 稀释液 缓冲液 C)。 稀释倍数:200 6. 酶联免疫分析程序 6.1 测定之前注意事项 1) 使用前将所有试剂平衡至室温(20-25℃)。 2) 使用后迅速将试剂放入 2-8℃冷藏。 3) 在 ELISA 分析中的再现性,很大程度上取决于 洗板的*性,正确的洗板操作是 ELISA 测定 程序中的要点。 4) 所有温育过程应避免阳光直射,并按要求用盖 板覆盖住酶标板。 6.2 溶液的配制 1) 提取液的配制: 根据实验所需的量配制 70%的 甲醇水溶液(水要用纯水、或蒸馏水、去离子 水) 2) 洗涤液的配制:将浓缩洗涤液用纯水稀释 10 倍后使用。(例如:取 10 ml 浓缩液+90 ml 纯 水, 可以用于 32 孔的检测)。 3) 0.1mol/L NaOH: 0.4g NaOH 溶解到 100ml 水中 4) 1 mol/L NaOH :4g NaOH 溶解到 100ml 水中 5) 乙腈-0.1 mol/L NaOH:90ml 乙腈中加入 10ml 0.1M NaOH 6) 6 mol/L 磷酸:100ml 浓磷酸加入 150ml 水 6.3 测定程序 1) 将足够标准品和样品所用数量的孔条插入酶 标板架,标准品和样品做两个平行实验,记录 下标准和样品的位置。未使用的酶标板用铝箔 袋封好置 2-8℃冷藏保存。 2) 吸取 50μl 标准品或样品分别加至相应的微孔 (双孔)中,然后各加入 50μl 的 ZER 酶标抗 原,再加入 50μl 的 ZER 抗体,加盖,在室温 温育 30 分钟(每个标准品和样品必须使用新 的吸头)。 3) 倒出孔中的液体,每孔加入 250μl 稀释好的洗 涤液,置于酶标板振荡器上振荡 30 秒钟(或 者手工振荡),重复操作四次。洗完后用力在 吸水纸上拍干。 4) 每孔加入150μl底物,室温避光温育10分钟。 5) 每孔加入50μl 终止液。 6) 置于酶标仪中,振荡混匀,在450nm处测定吸 光度值(OD值),参比波长630nm。(iElisa全 自动酶标仪可以直接读出、打印浓度值)。 7. 结果判定 1) 所获得的每个浓度标准溶液和样本吸光度值 的平均值(B)除以*个标准(0 标准)的吸 光度值(B0)再乘以 100%,即百分吸光度值。 百分吸光度值(%)= B ×100% B0 以玉米赤霉醇标准品浓度值(ppb)为 X 轴, 百分吸光度值为 Y 轴,绘制标准曲线图。相对应每 一个样品的浓度可以从标准曲线上读出。也可以用回归方程法,计算出样本溶液浓度。利用计算机专 业软件,更便于大量样品的快速分析。 2) 样品的实际浓度为读数结果乘以相应的稀释倍 数。 3) 如果测定值超出检测范围,样品提取溶液按一 定的比例进行稀释。 8. 注意事项 1) 室温低于20℃或试剂及样品未回到室温(20- 25℃)会导致数值偏低。 2) 在洗板过程中如果出现板孔干燥过久的情况, 则会出现标准曲线不成线性,重复性不好的现 象。所以洗板排干后应立即进行下一步操作。 3) 标准物质和显色液对光敏感,避免直接暴露在 光线下。 4) 混合要均匀,洗板要彻底(包括加样品和标准 液的时候都必需充分混合均匀)。 5) 终止液为强酸性物质,避免接触皮肤。 6) 不要使用过了有效期的试剂盒,也不要混合使 用不同批次的试剂盒,这样会引起测定结果不 准确。 7) 试剂盒的储存条件是2-8℃,切勿冷冻。 9. 检测方法灵敏度、准确度、精密度 1) 试剂盒灵敏度: 0.5ppb 2) 试剂盒变异系数:小于 20%。 3) 试剂盒准确度:回收率范围在 60%-120%之 间。

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