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产品名称: iElisa 黄曲霉毒素 B1 检测试剂盒
产品时间: 2019-10-23
产品型号: (C/N: CE201)
产品特点: iElisa 黄曲霉毒素 B1 检测试剂盒

iElisa 黄曲霉毒素 B1 检测试剂盒

iElisa 黄曲霉毒素 B1 检测试剂盒

iElisa 黄曲霉毒素 B1 检测试剂盒 的详细介绍

iElisa 黄曲霉毒素 B1 检测试剂盒

iElisa 黄曲霉毒素 B1 检测试剂盒

1. 概要 黄曲霉毒素是黄曲霉和寄生曲霉的有毒的代 谢产物,主要存在于谷物、坚果和饲料中。1993 年 黄曲霉毒素 B1 被世界卫生组织(WHO)的癌症研 究机构划定为Ⅰ类致癌物,是一类毒性极强的剧毒 物质。它被证明对人和动物的肝脏、肾脏等组织和 器官具有很大的危害。中国标准规定:黄曲霉毒素 B1 在玉米、大米、小麦中限量分别不得超过 20、 10、5μg/kg,各种饲料中黄曲霉毒素 B1 的限量标 准为 10-50μg/kg。 2. 原理 测定的基础是抗原-抗体反应。微孔板上包被有 抗抗体。加入黄曲霉毒素 B1(AF-B1)标准品或样 品、酶标抗原和抗体后,游离的黄曲霉毒素 B1 与 酶标抗原竞争结合抗体,抗体或抗体结合物与固定 在微孔板上的抗抗体再结合,没有结合的标准品、 酶标抗原及抗体被洗去,加入 TMB 底物显蓝色, 加入终止液后颜色由蓝变黄,用酶标仪在 450nm 处 检测,吸光值与样品中黄曲霉毒素 B1 含量成负相 关,与标准曲线比较即可得出黄曲霉毒素 B1 的含 量。 3. 试剂盒的组成 1) 包被有抗抗体的96微孔板:1块(96 孔,12条 ×8 孔) 2) 黄曲霉毒素B1标准品:0 ng/ml、0.1 ng/ml、 0.3ng/ml、0.5ng/ml、1.0ng/ml、2.0ng/ml 4.0ng/ml 1 瓶 × 1.0ml 3) AF-B1酶标抗原 1 瓶 ×10ml 4) AF-B1抗体 1 瓶 ×10ml 5) 10× 浓缩洗涤液: 1 瓶 × 50ml 6) AF-B1稀释缓冲液A: 1 瓶 ×50ml 7) AF-B1稀释缓冲液B: 1 瓶 ×50ml 8) 显色底物TMB: 1 瓶 ×17ml 9) 终止液: 1 瓶 × 7ml 10) 试剂盒说明书: 1 份 11) 质检报告: 1 份 4. 需要的仪器、试剂 1)仪器 —酶标仪 450nm(iElisa 全自动酶标仪或相当者) —微量移液器:20μl-200μl 单道,100μl-1000μl 单道, 50μl-300μl 八道 —多功能旋转混合器(或者摇床、高速均质器) —酶标板振荡器 —涡旋混合器 —氮气吹干仪 —50ml 离心管 —1.5ml 离心管 —离心机 —定性滤纸 —过滤漏斗 —天平:感量 0.01g 2) 试剂 —样品提取液 70%甲醇:取 700ml 甲醇,加 300ml 纯水,混匀。 —纯水(蒸馏水、去离子水)、正己烷、三氯甲烷、 甲醇 5. 样品处理 5.1 谷物(玉米、小麦、大麦、大米、大豆): 1) 称取 5.0g 粉碎样品于 50ml 离心管中,加入 25.0ml 样品提取液 70%甲醇,置于多功能旋转 混合器上振荡 10 分钟(或使用高速均质器均质 3 分钟,或摇床上振荡 40 分钟)。 2) 将提取液用普通滤纸过滤,吸取 200μl 滤液置 于 1.5ml 离心管中,加入 300μl AF-B1 稀释缓 冲液 A,用涡旋混合器混匀。 稀释倍数:12.5 5.2 饲料: 1) 称取 5.0g 粉碎样品于 50ml 离心管中,加入 25.0ml 样品提取液 70%甲醇,置于多功能旋转 混合器上振荡 10 分钟(或使用高速均质器均 质 3 分钟,或摇床上振荡 40 分钟)。 2) 将提取液用普通滤纸过滤,用 0.22μm 有机系 滤膜过滤后,取 100μl 滤液置于 1.5ml 离心管 中,加入 500ul AF-B1 稀释缓冲液 B,用涡旋 混合器混匀。 稀释倍数:305.3 植物油 1)称取 2.5g 油样品,加入 10mL 样品提取液(70% 甲醇水),剧烈振荡 3min(用手或振荡器),或 摇床震荡 10min。 2) 将提取液用普通滤纸过滤。吸取 200μl 滤液置 于 1.5ml 离心管中,加入 300μl AF-B1 稀释缓 冲液 A,用涡旋混合器混匀。 稀释倍数:10 倍 5.4 酱油、醋: 1) 取 5.0ml 样品于 50ml 离心管中,加入 25.0ml 三氯甲烷置于多功能旋转混合器上振荡 10 分 钟(或使用高速均质器均质 3 分钟,或摇床上 振荡 40 分钟)。 2) 4000 转离心 5 分钟,取下层三氯甲烷溶液 5ml 与氮气吹干仪(60℃)吹干。加入 4ml 70%甲 醇水涡旋混匀 1 分钟,使其充分复溶。 3) 吸取 200μl 复溶液置于 1.5ml 离心管中,加入 300μl AF-B1 稀释缓冲液 A,用涡旋混合器混 匀。 稀释倍数:10 5.5 糕点: 1) 取 5.0g 样品于 50ml 离心管中,加入 25.0ml 70% 甲醇水置于多功能旋转混合器上振荡 10 分钟 (或使用高速均质器均质 3 分钟,或摇床上振 荡 40 分钟)。 2) 定性滤纸过滤,取滤液 5ml 加入 10ml 三氯甲烷 涡旋 1min,4000 转离心 5 分钟,取下层澄清三 氯甲烷溶液 5ml 与氮气吹干仪(60℃)吹干。 加入 2ml 70%甲醇水涡旋混匀 1 分钟,使其充 分复溶。 3) 吸取 200μl 复溶液置于 1.5ml 离心管中,加入 300μl AF-B1 稀释缓冲液 A,用涡旋混合器混 匀。 稀释倍数:10 5.6 酒类(白酒、啤酒、威士忌、樱桃酒、葡萄酒 等) 1) 取 5.0ml 样品于 50ml 离心管中,加入 25.0ml 三氯甲烷置于多功能旋转混合器上振荡 10 分 钟(或使用高速均质器均质 3 分钟,或摇床上 振荡 40 分钟)。 2) 3000 转离心 5 分钟,取上层澄清溶液 5ml 于氮 气吹干仪(60℃)吹干。加入 5ml 70%甲醇水 涡旋混匀 1 分钟,使其充分复溶。 3) 吸取 200μl 复溶液置于 1.5ml 离心管中,加入 300μl AF-B1 稀释缓冲液 A,用涡旋混合器混 匀。 稀释倍数:12.5 5.7 发酵液: 1) 吸取 40μl 液体样品置于 1.5ml 离心管中 2) 加入 960μl AF-B1 稀释缓冲液 B,用涡旋混合 器混匀。 稀释倍数:25 5.8 尿液样品: 1) 取 5ml 待检样品于 15ml 离心管中,3000r/min, 离心 10 分钟 2) 吸取 100μl 离心后澄清样品置于 1.5ml 离心管 中 3) 加入 400μl AF-B1 稀释缓冲液 A,用涡旋混合 器混匀。 稀释倍数:5 5.1 豆瓣酱等: 1) 称取 5.0g 粉碎样品于 50ml 离心管中,加入 25.0ml 样品提取液 70%甲醇,置于多功能旋转 混合器上振荡 10 分钟(或使用高速均质器均质 3 分钟,或摇床上振荡 40 分钟)。 2) 将提取液用普通滤纸过滤,吸取 200μl 滤液置 于 1.5ml 离心管中,加入 300μl AF-B1 稀释缓 冲液 A,用涡旋混合器混匀。 稀释倍数:12.5 6. 酶联免疫分析程序 6.1 测定之前注意事项 1) 使用前将所有试剂平衡至室温(20-25℃)。 2) 使用后迅速将试剂放入 2-8℃冷藏。 3) 在 ELISA 分析中的再现性,很大程度上取决于 洗板的*性,正确的洗板操作是 ELISA 测定 程序中的要点。 4) 所有温育过程应避免阳光直射,并按要求用盖 板覆盖住酶标板。 6.2 溶液的配制 1) 提取液的配制: 根据实验所需的量配制 70%的 甲醇水溶液(水要用纯水、或蒸馏水、去离子 水) 2) 洗涤液的配制:将浓缩洗涤液用纯水稀释 10 倍后使用。(例如:取 10 ml 浓缩液+90 ml 纯 水, 可以用于 32 孔的检测)。 6.3 测定程序 1) 将足够标准品和样品所用数量的孔条插入酶标板架,标准品和样品做两个平行实验,记录 下标准和样品的位置。未使用的酶标板用铝箔 袋封好置 2-8℃冷藏保存。 2) 吸取 50μl 标准品或样品分别加至相应的微孔 (双孔)中,然后各加入 50μl AF-B1 酶标抗原, 再加入 50μl AF-B1 抗体,加盖,在室温温育 20 分钟(每个标准品和样品必须使用新的吸 头)。 3) 倒出孔中的液体,每孔加入 250μl 稀释好的洗 涤液,置于酶标板振荡器上振荡 30 秒钟(或 者手工振荡),重复操作四次。洗完后用力在 吸水纸上拍干。 4) 每孔加入150μl显色底物TMB,室温避光温育 10分钟。 5) 每孔加入50μl 终止液。 6) 置于酶标仪中,振荡混匀,在450nm处测定吸 光度值(OD值),参比波长630nm。(iElisa全 自动酶标仪可以直接读出、打印浓度值)。 7. 结果判定 1)所获得的每个浓度标准溶液和样本吸光度值的 平均值(B)除以*个标准(0 标准)的吸光 度值(B0)再乘以 100%,即百分吸光度值。 百分吸光度值(%)= B ×100% B0 以黄曲霉毒素 B1 标准品浓度值(ppb)为 X 轴, 百分吸光度值为 Y 轴,绘制标准曲线图。相对应每 一个样品的浓度可以从标准曲线上读出。也可以用 回归方程法,计算出样本溶液浓度。利用计算机专 业软件,更便于大量样品的快速分析。 2) 样品的实际浓度为读数结果乘以相应稀释倍 数。 3) 如果测定值超出检测范围,样品提取溶液按一 定的比例用 70%甲醇进行稀释。 8. 注意事项 1) 室温低于20℃或试剂及样品未回到室温(20- 25℃)会导致数值偏低。 2) 在洗板过程中如果出现板孔干燥过久的情况, 则会出现标准曲线不成线性,重复性不好的现 象。所以洗板排干后应立即进行下一步操作。 3) 标准物质和显色液对光敏感,避免直接暴露在 光线下。 4) 混合要均匀,洗板要彻底(包括加样品和标准 液的时候都必需充分混合均匀)。 5) 终止液为强酸性物质,避免接触皮肤。 6) 不要使用过了有效期的试剂盒,也不要混合使 用不同批次的试剂盒,这样会引起测定结果不 准确。 7) 试剂盒的储存条件是2-8℃,切勿冷冻。 9. 试剂盒的性能指标 1) 检测限 LOD: 谷 物 0.6ppb(μg/kg) , 饲 料 1.8ppb(μg/kg),植物油 0.6ppb(μg/kg),酱油、 醋 0.6ppb(μg/kg),糕点 0.6ppb(μg/kg),酒类 0.6ppb(μg/kg),发酵液 1.5ppb(μg/kg),尿液类 0.3ppb(μg/kg),豆瓣酱 1.0ppb。(LOD:空白样 品测定值+2 倍标准偏差 SD) 2) 定量限 LOQ: 谷 物 1.25ppb(μg/kg) , 饲 料 3.0ppb(μg/kg),植物油 1.0ppb(μg/kg),酱油、 醋 1.0ppb(μg/kg),糕点 1.0ppb(μg/kg),酒类 1.25ppb(μg/kg),发酵液 2.5ppb(μg/kg),尿液类 0.5ppb(μg/kg),豆瓣酱 2.0ppb。 3) 定 量 检 测 范 围 : 谷 物 1.25-50ppb , 饲 料 3.0-120ppb ,植物油 1.0-40ppb , 酱 油 、 醋 1.0-40ppb,糕点 1.0-40ppb,酒类 1.25-50ppb, 发酵液 2.5-100ppb, 尿液类 0.5ppb-20ppb,豆瓣 酱 2.0-50ppb。

 

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