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产品名称: iElisa 黄曲霉毒素 M1检测试剂盒
产品时间: 2019-10-23
产品型号: (C/N: CE 202)
产品特点: iElisa 黄曲霉毒素 M1检测试剂盒

iElisa 黄曲霉毒素 M1检测试剂盒

iElisa 黄曲霉毒素 M1检测试剂盒

iElisa 黄曲霉毒素 M1检测试剂盒 的详细介绍

iElisa 黄曲霉毒素 M1检测试剂盒

iElisa 黄曲霉毒素 M1检测试剂盒

1. 概要 黄曲霉毒素是一类真菌(如黄曲霉和寄生曲 霉)的有毒的代谢产物,它们具有很强的致癌性. 黄 曲霉毒素 M1 是黄曲霉毒素 B1的代谢产物。经摄入 含有黄曲霉毒素 B1饲料的奶牛产出的牛奶中,其中 便含有黄曲霉毒素 M1。由于黄曲霉毒素 M1 相当稳 定,巴氏灭菌法也无法将其杀灭,所以检测黄曲霉 毒素 M1 不仅要在饲料原料中检测,而且在最终产 品中的含量也需要进行测定。 黄曲霉毒素 M1 的检测方法有高效液相色谱法 (HPLC),薄层层析法(TLC)和酶联免疫吸附法 (ELISA)等。 用 iElisa 黄曲霉毒素 M1快速检测试剂盒可以准 确地检测牛奶、酸奶、奶酪和奶粉中的黄曲霉毒素 M1。 2. 原理 本产品是利用抗体-抗原免疫反应检测原理建 立的一种定量检测试剂盒。加入黄曲霉毒素M1 (AFLA M1)标准品或样品后,黄曲霉毒素M1与微 孔中的抗体相结合。洗去没有结合的黄曲霉毒素 M1,加入酶标抗原,与黄曲霉毒素M1与抗体没有 结合的部位相结合。洗去没有结合的酶标抗原,加 入TMB底物显蓝色,加入终止液后颜色由蓝变黄, 用酶标仪在450nm处检测,吸光值与样品中黄曲霉 毒素M1含量成负相关,与标准曲线比较即可得出黄 曲霉毒素M1的含量。 3. 试剂盒的组成 1) 包被有抗体的96微孔板:1块(96 孔,12 条×8 孔) 2) 黄曲霉M1标准品:0 ng/mL 、0.05 ng/mL、 0.1 ng/mL、0.2 ng/mL、0.5 ng/Ml: 1 瓶 × 1.0mL 3) AF-M1酶标抗原: 1 瓶 × 15mL 4) 10× 浓缩洗涤液: 1 瓶 × 50mL 5) AF-M1稀释缓冲液 1 瓶 × 50mL 6) 显色底物液: 1 瓶 ×12mL 7) 反应终止液: 1 瓶 × 13mL 8) 试剂盒说明书 9) 质控报告 4. 需要的仪器、试剂 1)仪器 —酶标仪 450nm(iElisa 全自动酶标仪或相当者) —微量移液器:20μL-200μL 单道,100μL-1000μL 单道, 50μL-300μL 八道 —高速离心机 —酶标板振荡器 —涡旋混合器 —振荡器 —蒸发设备、恒温箱 —100mL 量筒 —计时器 —天平:感量 0.01g —离心管 1.5mL、50mL 2)试剂 —甲醇、正庚烷、二氯甲烷 5. 样品处理 5.1 牛奶: 1) 取牛奶1.0 mL样品,用离心机(4000RPM)离 心10min.。 2) 离心后用移液器彻底去除上层奶油。 3) 取200μL下层脱脂牛奶,加入200μLAF-M1稀释 缓冲液(1:1)稀释。 稀释倍数:2 5.2 酸奶: 1) 取酸奶样品2.0g,用离心机(4000RPM)离心 10min 。(如没有冷冻离心机,可将样品先冷 却到10℃,再离心) 2) 离心后,取200μL上层澄清液于1.5mL离心管 中,加入200μL AF-M1稀释缓冲液(1:1)稀释, 涡旋混合器混匀。 稀释倍数:2 5.3 奶粉: 1) 用天平称取2.0g奶粉到锥形瓶中,再加入10ml 50℃左右的纯水(还原牛奶)。 2) 用力振荡3min.,使充分溶解。 3) 按照5.1牛奶样品处理步骤进行。 稀释倍数:10 (检测范围:0.5---5 ppb) 5.4 奶粉(高灵敏度):1) 用天平称取2.0g奶粉到锥形瓶中,再加入5ml 50℃左右的纯水(还原牛奶)。 2) 用力振荡3min.,使充分溶解。 3) 按照5.1牛奶样品处理步骤进行。 稀释倍数为5(检测范围:0.25---2.5 ppb) 5.5 奶酪: 1) 用天平称取2.0g粉碎的奶酪放入离心瓶中,加 入40.0mL二氯甲烷,充分溶解混匀后,剧烈振 荡15min.。 2) 过滤,取10.0mL,60℃氮气吹干。 3) 分别加入0.5mL甲醇、0.5mL PBS、1.0mL庚烷, 复容。 4) 3000转/分钟离心15min.。 5) 完全去除上层庚烷。 6) 取100μL下层提取液于1.5mL离心管中,加入 400μL AF-M1稀释缓冲液(1:4)稀释,涡旋混 合器混匀,取100μL用于检测。 稀释倍数:10 6. 酶联免疫分析程序 6.1 测定之前注意事项 1) 使用前将所有试剂平衡至室温(20-25℃)。 2) 使用后迅速将试剂放入 2-8℃冷藏。 3) 在 ELISA 分析中的再现性,很大程度上取决于 洗板的*性,正确的洗板操作是 ELISA 测定 程序中的要点。 4) 所有温育过程应避免阳光直射,并按要求用盖 板覆盖住酶标板。 6.2 溶液的配制 洗涤液的配制:将浓缩洗涤液用纯水稀释 10 倍后 使用。(例如:取 10 mL 浓缩液+90 mL 纯水, 可以 用于 32 孔的检测)。 6.3 测定程序 1) 将足够标准品和样品所用数量的孔条插入酶 标板架,标准品和样品做两个平行实验,记录 下标准和样品的位置。未使用的酶标板用铝箔 袋封好置 2-8℃冷藏保存。 2) 分别吸取100μL 标准品和样品加至相应的微 孔(双孔)中,,加盖,室温温育50min.。 3) 倒出孔中的液体,每孔加入 250μL 稀释好的洗 涤液,置于酶标板振荡器上振荡 30 秒钟(或 者手工振荡),重复操作四次。洗完后用力在 吸水纸上拍干。 4) 每孔加入AF-M1酶标抗原100μL,加盖,室温 温育30min.。 5) 倒出孔中的液体,每孔加入 250μL 稀释好的洗 涤液,置于酶标板振荡器上振荡 30 秒钟(或 者手工振荡),重复操作四次。洗完后用力在 吸水纸上拍干。 6) 每孔加入100μL显色底物液,加盖,室温温育 10min.。 7) 每孔加入50μL 反应终止液。 8) 置于酶标仪中,振荡混匀,在450nm处测定吸 光度值(OD值),参考波长630nm。(iElisa全 自动酶标仪可以直接读出、打印浓度值) 7. 结果判定 1) 所获得的每个浓度标准溶液和样本吸光度值 的平均值(B)除以*个标准(0 标准)的吸 光度值(B0)再乘以 100%,即百分吸光度值。 百分吸光度值(%)= B ×100% B0 以黄曲霉标准品浓度值(ppb)为 X 轴,百分 吸光度值为 Y 轴,绘制标准曲线图。相对应每一个 样品的浓度可以从标准曲线上读出。也可以用回归 方程法,计算出样本溶液浓度。利用计算机专业软 件,更便于大量样品的快速分析。 2) 样品的实际浓度为读数结果乘以相应稀释倍 数。 3) 如果测定值超出检测范围,样品提取溶液按一 定的比例用阴性牛奶样品进行稀释。 8. 注意事项 1) 室温低于20℃或试剂及标本未回到室温(20- 25℃)会导致数值偏低。 2) 在洗板过程中如果出现板孔干燥过久的情况, 则会出现标准曲线不成线性,重复性不好的现 象。所以洗板排干后应立即进行下一步操作。 3) 标准物质和显色液对光敏感,避免直接暴露在 光线下。 4) 混合要均匀,洗板要彻底(包括加样品和标准 液的时候都必需充分混合均匀)。 5) 反应停止液为强酸性物质,避免接触皮肤。 6) 不要使用过了有效期的试剂盒,也不要混合使 用不同批次的试剂盒,这样会引起测定结果不 准确。 7) 试剂盒的储存条件是2-8℃,切勿冷冻。 9. 检测方法灵敏度、准确度、精密度 1)试剂盒灵敏度: 0.05ppb 2)检测范围:牛奶 0.1---1.0 ppb酸奶 0.1---1.0 ppb 奶粉 0.5---5.0ppb;0.25---2.5 ppb 奶酪 0.5---5.0ppb 3)试剂盒变异系数:小于 20%。 4)试剂盒准确度:回收率范围在70%-110%之间。

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