iElisa 磺胺二甲基嘧啶检测试剂盒

iElisa 磺胺二甲基嘧啶检测试剂盒

1. 概要 本试剂盒是应用 ELISA 技术研发的药物残留检 测产品,与仪器分析技术比较，能经济、快速地检测 出肌肉组织、蜂蜜、牛奶、血清等中的磺胺二甲基 嘧啶。 2. 原理 本试剂盒是利用竞争 ELISA 方法，在酶标板微 孔上预包被抗磺胺二甲基嘧啶抗原。检测时，加入 标准品或样品溶液，磺胺二甲基嘧啶抗体及酶标记 物，包被抗原和加入样本中的磺胺二甲基嘧啶竞争 性地与磺胺二甲基嘧啶抗体结合后，再与酶标记物 形成抗原抗体复合物，用 TMB 底物显色；加入反 应终止液，在 450nm 波长酶标仪下进行检测，样品 中的磺胺二甲基嘧啶浓度与吸收光强度成反比。 与类似物的交叉反应率： 磺胺二甲基嘧啶（SM2）……………………………100% 磺胺间二甲氧嘧啶（SDM）…………………………10% 磺胺甲基嘧啶（SM1 ）………………………………12% 磺胺嘧啶 （ S D 或 S D Z ） …………………… … 4 % 磺胺甲噁唑（SMZ）……………………………………… 1% 3. 试剂盒组成 酶标板 1 块，96 孔/板 标准液 6 瓶（1ml/瓶）：0 ppb、1ppb、3ppb、9ppb、 27ppb、81ppb 抗体工作液 ………………………7ml 酶标记物 …………………………7ml 底物液 A …………………………7ml 底物液 B …………………………7ml 终止液 …………………………7ml 20X 浓缩洗涤液 ………………40 ml 2X 浓缩复溶液 ………………50 ml 说明书 ……………………………1 份 4. 需要的仪器、试剂 （1）设备 ……微孔板酶标仪(450nm) ……振荡器、离心机 ……微量移液器：20μl～200μl,100μl~1000μl ……容量瓶：100ml，500ml，1000ml （2）试剂 ……乙酸乙酯、正己烷、乙腈、Na2HPO4·12H2O、 NaOH 、浓 HCL 、NaH2PO4·2H2O 样本前处理需配制： 配液 1：0.2M NaOH 溶液 0.8gNaOH 用去离子水 100ml 溶解 配液 2：0.02M PB 缓冲液 称取 2.58g Na2HPO4•12H2O 和 0.44g NaH2PO4• 2H2O 加去离子水 500ml 溶解。 配液 3：复溶工作液 2X 浓缩复溶液在使用前请按 1：1 稀释 （1 份浓缩复溶液+1 份去离子水） 配液 4：洗涤液 将 40ml 浓缩洗涤液（20 倍浓缩）用去离子水稀释 20×浓缩洗涤液在使用前请按 1：19 稀释（1 份浓 缩洗涤液+19 份去离子水）（可按需配置, 稀释后的 洗涤液可在 4℃保存一个月） 5. 样品处理 样本处理前须知 处理任何样本时，都须注意： （1）实验中必须使用一次性吸头，在吸取不同的 试剂时要更换吸头。 （2）实验之前须检查各种实验器具是否干净，必 须使用洁净实验器具，以避免污染干扰实验结果。 样本处理步骤： （A）组 织（鸡、鸭、猪肌肉/肝脏、鸡蛋、鱼、 虾等） 1．称取 3±0.05g 匀浆物置 50ml 离心管中，先加入 3ml 0.02M PB 充分振荡混匀，再加入 4ml 乙酸 乙酯和 2ml 乙腈，充分振荡 5min，于室温 4000 转/ 分以上速度离心 10min； 2．移取 2ml 上层有机相（约相当于 1g 的样本）至 干净玻璃试管中,在 56℃水浴下氮气/空气吹干； 3．加入 1ml 正己烷溶解干燥的残留物，再加入 1ml 复溶工作液强烈振荡混合 30s，室温 4000 转/分，离 心 5min。 4．去除上层有机相，取 50µl 下层用于分析。样本稀释倍数：1 （B） 血清样本 1、将血样本于室温放置 30min，于 10℃，4000 转/ 分以上离心 10min，分离出血清或过滤血清； 2、取 1ml 血清，加入 3ml 0.02 M PB 缓冲液混合， 混合 30s； 3、取 50µl 用于分析。 样本稀释倍数：4 （C）蜂蜜 1、 称取 1±0.05g 蜂蜜样本于 50ml 离心管中，加 入 1ml 0.5M 盐酸 置于 37℃环境中 30min； 2、加入 2.5ml 0.2 M 氢氧化钠 (将 PH 值调至 5 左 右)再加入 4ml 乙酸乙脂振荡 5min，4000 转/分以上 室温离心 10min； 3、取 2ml 上层有机相至干净玻璃试管中，于 56℃ 水浴下氮气/空气吹干，加 0.5ml 复溶工作液复溶， 强烈振荡混合 30s； 4、取 50µl 用于分析。 样本稀释倍数：1 （D）牛奶 1、 取 1ml 牛奶样本用 0.02 M PB 缓冲液按 1︰19 （v/v）稀释（即 20µl 牛奶+380µl 0.02 M PB 缓冲 液），混合 30s； 2、 取 50µl 用于分析。 样本稀释倍数：20 6． 酶联免疫分析程序 测定前须知： 1、使用之前将所有试剂和需用微孔板回升至室温。 2、使用之后立即将所有试剂放回 2-8℃。 3、在使用中不要让微孔干燥。 4、在 ELISA 分析中的重复性，很大程度上取决于 洗板的*性，正确的洗板操作是 ELISA 测定程序 中的要点。 5、在所有恒温孵育过程中，避免光线照射，用该 板膜盖住微孔板。 测定步骤： 1、将所需试剂从冷藏环境中取出，在室温下平衡 30 分钟，每种液体使用前均须摇匀。注意标准液均 需做 2 个平行试验。 2、加标准品/样本 50µl /孔到各自的微孔中，然后加 酶标记物 50μ l/孔，再加入 50µl /孔的抗体工作液， 轻轻振荡混匀，用盖板膜盖板，37℃避光反应 30min 。 3、洗板：小心揭开盖板膜，将孔内液体甩干，加 洗涤液 250ml/孔，每次浸泡 15~30 秒，充分洗涤 4 －5 次，用吸水纸拍干。 4、显色：每孔先各加入底物液 A 50μ l，再各加入 底物液 B 50μ l，轻轻晃荡混匀，并在 37℃下避光 反应 15 分钟。 5、读数：每孔各加 50μ l 终止液，在酶标仪于 450nm 处测定 OD 值（建议用 450/630nm 双波长检测，在 5 分钟内读完数据）。 7. 结果判定 1) 所获得的每个浓度标准溶液和样本吸光度值 的平均值（B）除以*个标准（0 标准）的吸 光度值（B0）再乘以 100%，即百分吸光度值。 百分吸光度值（%）＝ B ×100% B0 以磺胺二甲基嘧啶准品浓度值（ppb）为 X 轴， 百分吸光度值为 Y 轴，绘制标准曲线图。相对应每 一个样品的浓度可以从标准曲线上读出。也可以用 回归方程法，计算出样本溶液浓度。利用计算机专 业软件，更便于大量样品的快速分析。 2） 样品的实际浓度为读数结果乘以相应稀释倍 数。 8. 注意事项 1） 室温低于20℃或试剂及标本未回到室温（20- 25℃）会导致数值偏低。 2) 在洗板过程中如果出现板孔干燥过久的情况， 则会出现标准曲线不成线性，重复性不好的现 象。所以洗板排干后应立即进行下一步操作。 3) 标准物质和显色液对光敏感，避免直接暴露在 光线下。 4) 混合要均匀，洗板要*（包括加样品和标准 液的时候都必需充分混合均匀）。 5) 反应停止液为强酸性物质，避免接触皮肤。 6) 不要使用过了有效期的试剂盒，也不要稀释或 搀杂使用不同生产厂家的试剂盒这样会引起 灵敏度降低。 7) 试剂盒的储存条件是2-8℃，切勿冷冻。 9. 检测方法灵敏度、准确度、精密度 1) 试剂盒灵敏度：1ppb 2) 样本低检测限： 血 清………………4ppb 组织、蜂蜜………………………1ppb牛 奶………………………………20ppb 回收率： 血 清 …………………………90±10% 组织、蜂蜜……………………………85±10% 牛 奶……………………………80±10% 精密度： 试剂盒的变异系数均小于 10%