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产品名称: iElisa 磺胺二甲基嘧啶检测试剂盒
产品时间: 2019-10-23
产品型号: (C/N: CE108)
产品特点: iElisa 磺胺二甲基嘧啶检测试剂盒

iElisa 磺胺二甲基嘧啶检测试剂盒

iElisa 磺胺二甲基嘧啶检测试剂盒

iElisa 磺胺二甲基嘧啶检测试剂盒 的详细介绍

iElisa 磺胺二甲基嘧啶检测试剂盒

iElisa 磺胺二甲基嘧啶检测试剂盒

1. 概要 本试剂盒是应用 ELISA 技术研发的药物残留检 测产品,与仪器分析技术比较,能经济、快速地检测 出肌肉组织、蜂蜜、牛奶、血清等中的磺胺二甲基 嘧啶。 2. 原理 本试剂盒是利用竞争 ELISA 方法,在酶标板微 孔上预包被抗磺胺二甲基嘧啶抗原。检测时,加入 标准品或样品溶液,磺胺二甲基嘧啶抗体及酶标记 物,包被抗原和加入样本中的磺胺二甲基嘧啶竞争 性地与磺胺二甲基嘧啶抗体结合后,再与酶标记物 形成抗原抗体复合物,用 TMB 底物显色;加入反 应终止液,在 450nm 波长酶标仪下进行检测,样品 中的磺胺二甲基嘧啶浓度与吸收光强度成反比。 与类似物的交叉反应率: 磺胺二甲基嘧啶(SM2)……………………………100% 磺胺间二甲氧嘧啶(SDM)…………………………10% 磺胺甲基嘧啶(SM1 )………………………………12% 磺胺嘧啶 ( S D 或 S D Z ) …………………… … 4 % 磺胺甲噁唑(SMZ)……………………………………… 1% 3. 试剂盒组成 酶标板 1 块,96 孔/板 标准液 6 瓶(1ml/瓶):0 ppb、1ppb、3ppb、9ppb、 27ppb、81ppb 抗体工作液 ………………………7ml 酶标记物 …………………………7ml 底物液 A …………………………7ml 底物液 B …………………………7ml 终止液 …………………………7ml 20X 浓缩洗涤液 ………………40 ml 2X 浓缩复溶液 ………………50 ml 说明书 ……………………………1 份 4. 需要的仪器、试剂 (1)设备 ……微孔板酶标仪(450nm) ……振荡器、离心机 ……微量移液器:20μl~200μl,100μl~1000μl ……容量瓶:100ml,500ml,1000ml (2)试剂 ……乙酸乙酯、正己烷、乙腈、Na2HPO4·12H2O、 NaOH 、浓 HCL 、NaH2PO4·2H2O 样本前处理需配制: 配液 1:0.2M NaOH 溶液 0.8gNaOH 用去离子水 100ml 溶解 配液 2:0.02M PB 缓冲液 称取 2.58g Na2HPO4•12H2O 和 0.44g NaH2PO4• 2H2O 加去离子水 500ml 溶解。 配液 3:复溶工作液 2X 浓缩复溶液在使用前请按 1:1 稀释 (1 份浓缩复溶液+1 份去离子水) 配液 4:洗涤液 将 40ml 浓缩洗涤液(20 倍浓缩)用去离子水稀释 20×浓缩洗涤液在使用前请按 1:19 稀释(1 份浓 缩洗涤液+19 份去离子水)(可按需配置, 稀释后的 洗涤液可在 4℃保存一个月) 5. 样品处理 样本处理前须知 处理任何样本时,都须注意: (1)实验中必须使用一次性吸头,在吸取不同的 试剂时要更换吸头。 (2)实验之前须检查各种实验器具是否干净,必 须使用洁净实验器具,以避免污染干扰实验结果。 样本处理步骤: (A)组 织(鸡、鸭、猪肌肉/肝脏、鸡蛋、鱼、 虾等) 1.称取 3±0.05g 匀浆物置 50ml 离心管中,先加入 3ml 0.02M PB 充分振荡混匀,再加入 4ml 乙酸 乙酯和 2ml 乙腈,充分振荡 5min,于室温 4000 转/ 分以上速度离心 10min; 2.移取 2ml 上层有机相(约相当于 1g 的样本)至 干净玻璃试管中,在 56℃水浴下氮气/空气吹干; 3.加入 1ml 正己烷溶解干燥的残留物,再加入 1ml 复溶工作液强烈振荡混合 30s,室温 4000 转/分,离 心 5min。 4.去除上层有机相,取 50µl 下层用于分析。样本稀释倍数:1 (B) 血清样本 1、将血样本于室温放置 30min,于 10℃,4000 转/ 分以上离心 10min,分离出血清或过滤血清; 2、取 1ml 血清,加入 3ml 0.02 M PB 缓冲液混合, 混合 30s; 3、取 50µl 用于分析。 样本稀释倍数:4 (C)蜂蜜 1、 称取 1±0.05g 蜂蜜样本于 50ml 离心管中,加 入 1ml 0.5M 盐酸 置于 37℃环境中 30min; 2、加入 2.5ml 0.2 M 氢氧化钠 (将 PH 值调至 5 左 右)再加入 4ml 乙酸乙脂振荡 5min,4000 转/分以上 室温离心 10min; 3、取 2ml 上层有机相至干净玻璃试管中,于 56℃ 水浴下氮气/空气吹干,加 0.5ml 复溶工作液复溶, 强烈振荡混合 30s; 4、取 50µl 用于分析。 样本稀释倍数:1 (D)牛奶 1、 取 1ml 牛奶样本用 0.02 M PB 缓冲液按 1︰19 (v/v)稀释(即 20µl 牛奶+380µl 0.02 M PB 缓冲 液),混合 30s; 2、 取 50µl 用于分析。 样本稀释倍数:20 6. 酶联免疫分析程序 测定前须知: 1、使用之前将所有试剂和需用微孔板回升至室温。 2、使用之后立即将所有试剂放回 2-8℃。 3、在使用中不要让微孔干燥。 4、在 ELISA 分析中的重复性,很大程度上取决于 洗板的*性,正确的洗板操作是 ELISA 测定程序 中的要点。 5、在所有恒温孵育过程中,避免光线照射,用该 板膜盖住微孔板。 测定步骤: 1、将所需试剂从冷藏环境中取出,在室温下平衡 30 分钟,每种液体使用前均须摇匀。注意标准液均 需做 2 个平行试验。 2、加标准品/样本 50µl /孔到各自的微孔中,然后加 酶标记物 50μ l/孔,再加入 50µl /孔的抗体工作液, 轻轻振荡混匀,用盖板膜盖板,37℃避光反应 30min 。 3、洗板:小心揭开盖板膜,将孔内液体甩干,加 洗涤液 250ml/孔,每次浸泡 15~30 秒,充分洗涤 4 -5 次,用吸水纸拍干。 4、显色:每孔先各加入底物液 A 50μ l,再各加入 底物液 B 50μ l,轻轻晃荡混匀,并在 37℃下避光 反应 15 分钟。 5、读数:每孔各加 50μ l 终止液,在酶标仪于 450nm 处测定 OD 值(建议用 450/630nm 双波长检测,在 5 分钟内读完数据)。 7. 结果判定 1) 所获得的每个浓度标准溶液和样本吸光度值 的平均值(B)除以*个标准(0 标准)的吸 光度值(B0)再乘以 100%,即百分吸光度值。 百分吸光度值(%)= B ×100% B0 以磺胺二甲基嘧啶准品浓度值(ppb)为 X 轴, 百分吸光度值为 Y 轴,绘制标准曲线图。相对应每 一个样品的浓度可以从标准曲线上读出。也可以用 回归方程法,计算出样本溶液浓度。利用计算机专 业软件,更便于大量样品的快速分析。 2) 样品的实际浓度为读数结果乘以相应稀释倍 数。 8. 注意事项 1) 室温低于20℃或试剂及标本未回到室温(20- 25℃)会导致数值偏低。 2) 在洗板过程中如果出现板孔干燥过久的情况, 则会出现标准曲线不成线性,重复性不好的现 象。所以洗板排干后应立即进行下一步操作。 3) 标准物质和显色液对光敏感,避免直接暴露在 光线下。 4) 混合要均匀,洗板要彻底(包括加样品和标准 液的时候都必需充分混合均匀)。 5) 反应停止液为强酸性物质,避免接触皮肤。 6) 不要使用过了有效期的试剂盒,也不要稀释或 搀杂使用不同生产厂家的试剂盒这样会引起 灵敏度降低。 7) 试剂盒的储存条件是2-8℃,切勿冷冻。 9. 检测方法灵敏度、准确度、精密度 1) 试剂盒灵敏度:1ppb 2) 样本最低检测限: 血 清………………4ppb 组织、蜂蜜………………………1ppb牛 奶………………………………20ppb 回收率: 血 清 …………………………90±10% 组织、蜂蜜……………………………85±10% 牛 奶……………………………80±10% 精密度: 试剂盒的变异系数均小于 10%

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