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产品名称: iElisa 喹乙醇检测试剂盒
产品时间: 2019-10-23
产品型号: (C/N: CE145)
产品特点: iElisa 喹乙醇检测试剂盒

iElisa 喹乙醇检测试剂盒

iElisa 喹乙醇检测试剂盒

iElisa 喹乙醇检测试剂盒 的详细介绍

iElisa 喹乙醇检测试剂盒

iElisa 喹乙醇检测试剂盒

1. 概要 喹乙醇又称喹酰胺醇,商品名为倍育诺、快育 灵,由于喹乙醇有中度至明显的蓄积毒性,对大多 数动物有明显致畸作用,对人也有潜在的三致性, 即致畸形,致突变,致癌。因此喹乙醇在美国和欧 盟都被禁止用作饲料添加剂。《中国兽药典》(2005 版)也有明确规定,喹乙醇被禁止用于家禽及水产养 殖。 2. 原理 本试剂盒采用间接竞争 ELISA 方法检测等样 本中的喹乙醇,在微孔条上预包被上偶联抗原,利 用抗原与抗体的特异性免疫化学反应的原理来进 行的,样本中的喹乙醇和微孔条上预包被偶联抗原 竞争抗喹乙醇抗体,加入酶标记物后,用 TMB 底 物显色,样品中的喹乙醇含量与样品的吸光度值呈 反比,与标准曲线比较即可得出喹乙醇含量。 3. 试剂盒的组成 1) 包被有抗抗体的96微孔板:1块(96 孔,12条 ×8 孔) 2) 黄曲霉毒素B1标准品:0 ng/ml、0.5 ng/ml、 2.0ng/ml、5.0ng/ml、20ng/ml、50ng/ml 1 瓶 × 1.0ml 3) 喹乙醇抗体 1 瓶 ×10ml 4) 酶标二抗 1 瓶 ×10ml 5) 10× 浓缩洗涤液: 1 瓶 × 50ml 6) 稀释缓冲液A: 1 瓶 ×50ml 7) 稀释缓冲液B: 1 瓶 ×50ml 8) 显色底物TMB: 1 瓶 ×17ml 9) 终止液: 1 瓶 × 7ml 10) 试剂盒说明书: 1 份 11) 质检报告: 1 份 4. 需要的仪器、试剂 1)仪器 —酶标仪 450nm(iElisa 全自动酶标仪或相当者) —微量移液器:20μl-200μl 单道,100μl-1000μl 单道, 50μl-300μl 八道 —多功能旋转混合器(或者摇床、高速均质器) —酶标板振荡器 —涡旋混合器 —氮气吹干仪 —50ml 离心管 —1.5ml 离心管 —离心机 —定性滤纸 —过滤漏斗 —天平:感量 0.01g 2) 试剂 —样品提取液 70%甲醇:取 700ml 甲醇,加 300ml 纯水,混匀。 —纯水(蒸馏水、去离子水)、正己烷、三氯甲烷、 甲醇 5. 样品处理 5.1 谷物类(玉米、小麦、大麦、大米、大豆): 1) 称取 5.0g 粉碎(20 目过筛)的谷物类样品于 50mL 离心管中,加入 25.0mL 纯净水提取液, 60℃水浴 10 分钟,而后置于旋转摇床上旋转振 荡提取 10 分钟(或用高速均质器均质 1 分钟, 或用手剧烈振荡 5 分钟),用定性滤纸过滤。 2) 将提取液用普通滤纸过滤,吸取 100μl 滤液置 于 1.5ml 离心管中,加入 400μl 稀释缓冲液 A, 用涡旋混合器混匀。 稀释倍数:25 5.2 饲料类: 1) 称取 5.0g 粉碎(20 目过筛)的饲料样品于 50mL 离心管中,加入 25.0mL 纯净水提取液,60℃ 水浴 10 分钟,而后置于旋转摇床上旋转振荡 提取 10 分钟(或用高速均质器均质 1 分钟,或 用手剧烈振荡 5 分钟),用定性滤纸过滤。 2) 将提取液用普通滤纸过滤,取 100μl 滤液置于 1.5ml 离心管中,加入 400μl 稀释缓冲液 B,用 涡旋混合器混匀。 稀释倍数:25 6. 酶联免疫分析程序 6.1 测定之前注意事项1) 使用前将所有试剂平衡至室温(20-25℃)。 2) 使用后迅速将试剂放入 2-8℃冷藏。 3) 在 ELISA 分析中的再现性,很大程度上取决于 洗板的*性,正确的洗板操作是 ELISA 测定 程序中的要点。 4) 所有温育过程应避免阳光直射,并按要求用盖 板覆盖住酶标板。 6.2 溶液的配制 1) 提取液的配制:水要用纯水、或蒸馏水、去离子 水 2) 洗涤液的配制:将浓缩洗涤液用纯水稀释 10 倍后使用。(例如:取 10 ml 浓缩液+90 ml 纯 水, 可以用于 32 孔的检测)。 6.3 测定程序 1) 将足够标准品和样品所用数量的孔条插入酶 标板架,标准品和样品做两个平行实验,记录 下标准和样品的位置。未使用的酶标板用铝箔 袋封好置 2-8℃冷藏保存。 2) 吸取 50μl 标准品或样品分别加至相应的微孔 (双孔)中,然后各加入 50μl 喹乙醇抗体,加 盖,在 37℃温育 30 分钟(每个标准品和样品 必须使用新的吸头)。 3) 倒出孔中的液体,每孔加入 250μl 稀释好的洗 涤液,置于酶标板振荡器上振荡 30 秒钟(或 者手工振荡),重复操作四次。洗完后用力在 吸水纸上拍干。 4) 再加入 100μl 酶标抗体,加盖,37℃温育 30 分钟(每个标准品和样品必须使用新的吸头)。 5) 倒出孔中的液体,每孔加入 250μl 稀释好的洗 涤液,置于酶标板振荡器上振荡 30 秒钟(或 者手工振荡),重复操作四次。洗完后用力在 吸水纸上拍干。 6) 每孔加入100μl显色底物TMB,室温避光温育 10分钟。 7) 每孔加入50μl 终止液。 8) 置于酶标仪中,振荡混匀,在450nm处测定吸 光度值(OD值),参比波长630nm。(iElisa全 自动酶标仪可以直接读出、打印浓度值)。 7. 结果判定 1)所获得的每个浓度标准溶液和样本吸光度值的 平均值(B)除以*个标准(0 标准)的吸光 度值(B0)再乘以 100%,即百分吸光度值。 百分吸光度值(%)= B ×100% B0 以喹乙醇标准品浓度值(ppb)为 X 轴,百分吸 光度值为 Y 轴,绘制标准曲线图。相对应每一个样 品的浓度可以从标准曲线上读出。也可以用回归方 程法,计算出样本溶液浓度。利用计算机专业软件, 更便于大量样品的快速分析。 2) 样品的实际浓度为读数结果乘以相应稀释倍 数。 3) 如果测定值超出检测范围,样品提取溶液按一 定的比例用提取液进行稀释。 8. 注意事项 1) 室温低于20℃或试剂及样品未回到室温(20- 25℃)会导致数值偏低。 2) 在洗板过程中如果出现板孔干燥过久的情况, 则会出现标准曲线不成线性,重复性不好的现 象。所以洗板排干后应立即进行下一步操作。 3) 标准物质和显色液对光敏感,避免直接暴露在 光线下。 4) 混合要均匀,洗板要彻底(包括加样品和标准 液的时候都必需充分混合均匀)。 5) 终止液为强酸性物质,避免接触皮肤。 6) 不要使用过了有效期的试剂盒,也不要混合使 用不同批次的试剂盒,这样会引起测定结果不 准确。 7) 试剂盒的储存条件是2-8℃,切勿冷冻。 9. 试剂盒的性能指标 1) 检 测 限 LOD: 谷 物 10ppb(μg/kg) ,饲料 10ppb(μg/kg)。(LOD:空白样品测定值+2 倍标 准偏差 SD) 2) 定量限 LOQ: 谷 物 12.5ppb(μg/kg) , 饲 料 12.5ppb(μg/kg)。 3) 定量检测范围:谷物 12.5-2500ppb,饲料 12.5-2500ppb。

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